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近日，Horticulture Research在线发表了西北农林科技大学葡萄种质资源与育种团队王西平课题组题为“Whole genome sequencing reveals rare off-target mutations in CRISPR/Cas9-edited grapevine”的研究论文。青年教师王现行与涂明星博士为该文第一作者，王西平教授为通讯作者。
利用CRISPR/Cas9系统定点编辑葡萄白粉病感病基因VviEDR2（Enhanced disease resistance 2），在VviEDR2的DUF1336结构域设计靶位点VviEDR2-T1，构建CRISPR/Cas9敲除载体，通过农杆菌介导法转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织。对PCR阳性植株进行靶位点扩增测序，结果表明，共有8个转基因植株在靶位点处发生不同类型的双等位基因突变，编辑效率...
利用CRISPR/Cas9敲除葡萄VviPDS1基因的研究
葡萄 CRISPR/Cas9 PDS1 基因编辑
2019/6/5
选择葡萄八氢番茄红素脱氢酶（Phytoene desaturase）基因VviPDS1为靶标，利用CRISPR/Cas9系统构建基因敲除载体，瞬时转化葡萄叶片原生质体，检测到不同类型的突变。通过农杆菌介导转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织，筛选获得卡那霉素抗性植株71株。经PCR鉴定，其中53株为阳性植株，阳性率为74.64%。测序结果表明，共有20株在靶点发生不同类型的突变，编辑效率为37.74%；...
CRISPR/Cas9介导柑橘CsLOB1基因启动子的多位点编辑
柑橘 CRISPR/Cas9系统 CsLOB1 多位点 基因编辑
2019/3/19
为了获得CsLOB1启动子较大片段删除的突变体，利用CRISPR/Cas9技术对CsLOB1启动子进行多位点编辑。通过在CsLOB1启动子的EBEPthA4区域及其上、下游设计不同的靶标位点，构建了2个植物表达载体pCas9CsLOB1:2sites和pCas9CsLOB1:3sites，分别对CsLOB1启动子同时进行2个位点和3个位点的编辑。测序结果表明pCas9CsLOB1:2sites和p...
以芥蓝（Brassica oleracea var. alboglabra）为材料，以ζ–胡萝卜素脱氢酶（ζ-Carotene desaturase，ZDS）基因为目标基因，建立其CRISPR/Cas9基因组编辑体系。在BoaZDS的编码区近5′ 端选择靶位点，构建了CRISPR/Cas9表达载体，通过农杆菌介导的遗传转化方法获得了19个芥蓝转基因阳性植株，Sanger测序分析发现其中13株成功突...
应用CRISPR/Cas9 体系对番茄PSY 1 基因的定点编辑
CRISPR-Cas9 PSY 1 基因 番茄 基因敲除
2018/12/13
基于NCBI 数据库提供的番茄八氢番茄红素合成酶基因（PSY 1）全长，并根据基因序列中PAM（proto adjacentmotif）的位置设计特异性sgRNA，构建CRISPR/Cas9 Level 1、Level 2 载体；将设计好的载体转化农杆菌，继而转染番茄子叶，利用PCR 产物测序法检测sgRNA 在番茄基因组中的敲除效率。结果表明，36 个转基因植株中有22 个PSY 1 基因目标区...
香蕉CRISPR/Cas9基因编辑技术体系的建立
香蕉 CRISPR/Cas9 MaPDS 基因编辑
2017/11/14
建立香蕉CRISPR/Cas9基因编辑技术体系，为在香蕉上利用CRISPR/CAS9技术开展香蕉基因功能研究和香蕉育种工作开辟新的路径。【方法】根据香蕉A基因组八氢番茄红素脱氢酶（phytoene dehydrogenase，PDS）基因组序列，利用在线工具ZiFiT Targeter Version 4.2确定合适的CRISPR/Cas9靶标序列，选择其中一个位点作为靶标位点，设计包含靶标基因M...