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一个小鼠未分化胚胎癌细胞特异cDNA的分子克隆
胚胎癌细胞分子克隆
2008/2/3
摘要用胚胎癌细胞株(EC)PCC3的poly(A)+RNA及质粒pBR322在大肠杆菌中建立了一个cDNA文库。 用另一株EC细胞F9及由EC细胞衍生的分化细胞株滋养层母细胞癌TDM1的32PcDNA作探针，对P CC3 cDNA文库作了差别筛选。自3，000个cDNA克隆中筛出25个克隆。其中1个克隆MS3含有长 250bp的cDNA。用MS3 cDNA作探针，在F9细胞中能检出1个占poly(...
摘要为了合成3p端无pol式A）的病毒RNA（登革热病毒II）的3’区的长的cDNA，我们用RNA连接酶，把30端被PCP封闭了的Poly(A) <50bP连在病毒RNA的3'端，构成一个病毒RNA-posy( A升PC P型模板，可用oligo(dT,。一：：）作引物，再用Watson和Jackson (1985)的RNase H代替硷降解法来合成CDNA。结果获得了）5kb的cDNA。重组克隆...
鲑鱼泌乳素cDNA的分子克隆和序列分析
泌乳素 cDNA DNA硷基序列分析
2008/2/3
摘要从太平洋切奴克鲑鱼的垂体制备cDNA文库。按照鲑鱼泌乳素的部分蛋白质序列所提供的信息 合成寡聚脱氧核苷酸探针。用探针筛查泌乳素基因，识别出一个阳性克隆PRL-10。该克隆的 硷基序列已被测出。PRL-10的总长为1.1kb,编码了含有211个氨基酸组成的泌乳素前体，其 中包括了编码23个氨基酸的信号肽序列和编码188个氨基酸的成熟泌乳素序列。
单克隆抗体γ3重链可变区cDNA 合成与克隆
单克隆抗体 Vγ3重链 cDNA 克隆
2008/2/2
摘要用异硫氰酸胍法从分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，经oligo（dT）-纤维素柱亲 和层析获得poly(A)+RNA后，用恒定区5' 端第122-125号氨基酸密码的互补序列3' A-T-A-G- G-T-G-A-C-C 5' 做为引物，进行逆转录酶反应，合成双链cDNA，大小为300bp左右，与重链 可变区基因的长度相符。用dC:dG接尾的方法，将ds-cDNA插入pUC19质粒，转...
野生大豆未成熟种子总mRNA的分离及其cDNA的分子克隆
野生大豆 mRNA cDNA 克隆
2008/2/2
摘要用氯化锂沉淀法从野生大豆(G.sojα)未成熟种子中制备总RNA，经oligo(dT)-纤维素柱亲和 层析，获得总mRNA，在兔网织红细胞体系中表现出一定翻译活性。以总mRNA为模板，oligo( dT)12 18 为引物，反转录酶催化合成第一链cDNA，RNaseH-DNA聚合酶Ι协同合成第二链cDN A。双链cDNA的长度大约为200-5000bp，且不存在发夹结构。将双链cDNA修补后钝...
芜菁花叶病毒(TuMV)核酸cDNA的合成与克隆
芜菁花叶病毒(TuMV) cDNA 分子克隆 菌落原位杂交
2008/2/2
摘要从接种芜菁花叶病毒后发病芥菜(Brassica iuneaen)中提取病毒，然后提取其核酸(TuMV-RN A)。以纯化的TuMV-RNA为模板，以Oligo(dT)12-18及小牛胸腺DNA水解物为引物，合成双链c DNA，双链cDNA长度约500—4300bp。将双链cDNA补齐后，钝端连接到pUC19质粒的Smal位点 ，转化E.coli DH5a获得500多个白色克隆。菌落原位杂交及酶...
摘要按DNA-磷酸钙共沉淀法将人白细胞介素2受体(IL-2R)cDNA转染小鼠成纤维细胞L929，经RNA 点琐杂交分析、荧光标记IL-2染色和抗Tac(人IL-2受体α链)特异性玫瑰花环试验，均证明 转入的IL-2R cDNA在L929细胞中表达，其产物具有结合IL-2和抗Tac抗体的能力。本文还报 道了T细胞白血病Jukat细胞和Molt-4等细胞系异常表达IL-2R的结果，并对此作了分析和讨...
hTERT cDNA片段的克隆及其单克隆抗体与喉癌的发病机制
端粒酶 单克隆抗体 喉癌 免疫组化
2008/2/1
摘要端粒酶的激活及其调控机制至今仍不清楚。为研究喉癌发生中端粒酶表达规律及激活的可能机制，我们克隆了hTERT cDNA片段并制备了抗hTERT单克隆抗体。应用此抗体对喉癌组织进行了免疫组化检测，发现喉癌分化程度降低与癌组织中hTERT阳性细胞率增高有关；而C-Myc表达与hTERT表达呈明显正相关，提示C-Myc可能对喉癌发生过程中端粒酶的激活起着重要作用。这些研究表明，喉癌的发生可能是由于C-...
人类PKNOX1基因一种新剪接型全长cDNA的克隆与表达分析
基因克隆 差异剪接 Downs综合征 表达谱
2008/1/31
摘要为了寻找新的Down's综合征相关基因，利用生物信息学分析与实验技术相结合的方法，从定位于Down's综合征关键区内（21q22.3）的EST（GenBank登录号H77399）出发，从人类睾丸组织cDNA文库内克隆到含同源盒结构域转录因子PKNOX1的一种新剪接型全长cDNA，命名为PKNOX1B，GenBank登陆号AY142115。PKNOX1B基因跨越58.4 kb，全长cDNA约2....
一个陆地棉羧基末端蛋白酶cDNA的克隆及其表达分析
陆地棉 羧基末端蛋白酶 表达特性
2008/1/30
摘要利用PCR筛选方法从陆地棉纤维cDNA文库中分离出1个基因序列，命名为GhCtp。该cDNA全长1 917 bp，编码1个含473个氨基酸残基的多肽。GhCtp蛋白与拟南芥和水稻中的一类羧基末端蛋白酶具有较高的同源性，在GhCtp的N-末端有1个精氨酸富集区，而C-末端有1个Pfam数据库中编号为DUF239的高度保守区域；该蛋白的N-末端还存在1个在拟南芥和水稻羧基蛋白酶中所缺乏的ATP/G...
猪特异性脂肪细胞膜蛋白基因cDNA 5端的分子克隆
猪 PAMP基因 克隆
2008/1/30
摘要猪特异性脂肪细胞膜蛋白是近年来才被报道的一种可能与前脂肪细胞生长、发育和脂肪沉积调控有关的蛋白质。采用RT-PCR和RACE技术,首次获得猪特异性脂肪细胞膜蛋白基因cDNA 5'端的克隆和序列。
水稻葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA的电子克隆
水稻 电子克隆 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 RT-PCR
2008/1/29
摘要电子克隆是基因克隆的新策略.以小麦胞质葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA (Tagpdl克隆)序列为信息探针,在GenBank水稻nr数据库中找到高度同源的水稻基因组序列,通过人工序列拼接及RT-PCR确认得到了水稻该基因的全长cDNA序列,命名为OsG6PDH.OsG6PDH与小麦Tagpdl克隆的DNA一致率为88%,推导的氨基酸序列与小麦、番茄、烟草的胞质葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的一致率分...
一个陆地棉bZIP蛋白cDNA的克隆及表达分析
陆地棉 bZIP蛋白 表达特性
2008/1/29
摘要利用PCR筛选方法从陆地棉纤维cDNA文库中筛选到一个全长cDNA序列，命名为GhbZIP。其编码产物长度为645 个氨基酸残基，序列中含有两个未知功能的保守区域DUF630和DUF632，而DUF632区中有一个类似碱性亮氨酸拉链基元；此外氨基酸序列中还存在一个富脯氨酸区和一个富苯丙氨酸区，因此该蛋白具有植物碱性亮氨酸拉链蛋白的结构特征。亲水性分析表明，GhbZIP为一个典型的膜蛋白。Ghb...
摘要 应用克隆的基因组序列作为同源臂，构建了小鼠b-酪蛋白基因定位敲入打靶载体。短臂长2.7 kb，包括小鼠b-酪蛋白基因5′端侧翼区、第1外显子、第1内含子、部分第2外显子。长臂包括小鼠b-酪蛋白基因部分第2内含子、第3 ~ 7外显子、第3 ~ 6内含子、部分第7内含子，长3.4 kb。人t-PA突变体cDNA在第2外显子中，与小鼠b-酪蛋白信号肽序列融合。正筛选标记neo放置在b-酪蛋白基因第...