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牛催乳素基因组及其cDNA全长序列的分子克隆和分析
长距离PCR 牛催乳素 分子克隆 序列分析
2008/1/26
摘要通过Long PCR等技术首次克隆得到全长9388bp的牛催乳素(bPRL)基因组序列
(GenBank登录号AF426315),其中包括bPRL基因全部5个外显子和4个内含子,5′端854bp
的上游调控区以及3′端69bp的UTR。AF426315基因编码的蛋白质在GenBank中的序号为AAL28075,由229个氨基酸残基组成,1-30位氨基酸残基为信号肽序列,成熟的多肽含有
1...
构建转CgA基因反向cDNA片段小鼠模型
CgA基因 反义RNA 转基因小鼠
2008/1/26
摘要为了制作CgA基因反义RNA转基因小鼠,构建了质粒pCAS2C,并把pCAS2C中完整的反义表达框显微注射入小鼠受精卵的雌原核中,随后将注射过DNA的受精卵移植入假孕鼠的输卵管中。假母所产子一代都用p1和p4引物对鼠尾基因组DNA进行PCR检测,选出2只首建鼠(PCR阳性).首建鼠与正常鼠杂交后得到F1代小鼠,经PCR方法筛选出来的阳性F1代鼠雌雄自交产生F2代。为了检测F2代鼠的基因型,将P...
鱼类谷胱甘肽转移酶基因cDNA克隆及其序列分析
谷胱甘肽转移酶Pi型 鲢 鲤 鲫
2008/1/26
摘要采用RT-PCR方法, 从鲢、鲤、鲫3种鱼类肝脏总RNA中克隆出了谷胱甘肽转移酶Pi型(GST Pi)cDNA序列, 推导了其编码的氨基酸序列。3种鱼类GST Pi的ORF全长627 bp, 编码208个氨基酸。翻译起始密码均为ATG, 终止密码子均为TGA。鱼类与哺乳动物、两栖类爪蟾以及节肢动物丝虫之间GST Pi氨基酸序列相似度平均值分别为50%、33%、15%左右。5种鱼类之间的氨基酸序...
摘要 从大鼠精子尾部基因Spag4 出发，在dbEST数据库中同源搜寻与大鼠Spag4基因编码氨基酸同源性较高的表达序列标签(Expressed Sequence Tag, EST)， 找到两个在小鼠精母细胞中表达的ESTs ，BG101130 和 BG100990。通过电子杂交得到1 155 bp的片段，包含了小鼠假想基因AK006225的全部序列，定位于2H1-H2，其开放阅读框为87～1 ...
摘要报道了人肝脏中一种新的NRDR剪接体（NRDR short isoform, NRDRiso）cDNA的发现与克隆。在用RT-PCR法局部扩增人与小鼠肝脏635 bp的NRDR DNA时，在人肝中发现了另一短序列PCR产物，克隆后测序显示其整个序列与NRDR cDNA编码区的前后序列完全一致。采用3′-Race和5′-Race方法，从人肝组织细胞中扩增得到两个全长cDNA，除1261 bp的N...
三个品种家鸡催乳素基因 cDNA的克隆及序列分析
家鸡 催乳素 克隆 序列分析
2008/1/25
摘要从粤黄鸡、丝毛乌骨鸡及伊莎蛋鸡的垂体中快速抽提总RNA,根据国外已发表的肉用仔鸡催乳素基因cDNA的序列,设计并合成了能与特定载体末端互补的1对引物,经反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段与线性化质粒pBSSK连接,克隆后进行序列分析,与已报道的肉用仔鸡、矮脚鸡和火鸡催乳素基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行了比较.结果表明,不同品种间核苷酸同源性介于9...
小麦盐胁迫应答cDNA的分离克隆及其特异片段SR07转烟草抗逆性分析
小麦 盐胁迫应答cDNA 烟草 抗逆性
2008/1/24
摘要0.05），而PEG和甘露醇抗性与对照株相比有显著性差异（P<0.05），推测SR07表达蛋白可能在植物水分调节方面有重要作用。
摘要从血液中提取总RNA，根据α珠蛋白氨基酸序列的N末端和C末端碱基序列的保守性设计20个碱基长的简并引物，用RT-PCR方法扩增并克隆了鲤鱼（Cyprinus carpio）、草鱼（Ctenopharyngodon idellus）、鲫鱼(Carassius auratus)、泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)和大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus...
番茄GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶cDNA的克隆、表达及定位
番茄 GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶 分子克隆 基因表达 定位
2008/1/23
GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶催化GDP-D-甘露糖的合成，是植物抗坏血酸生物合成途径中上游的关键酶。以马铃薯GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶cDNA序列为信息探针，在GenBank dbEST数据库中找到65条高度同源的番茄EST序列，通过序列拼接及RACE-PCR得到了番茄该基因的全长cDNA序列，命名为LeGMP。LeGMP 与马铃薯GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶cDNA序列一致率为96%，推导的氨...
通过显微注射技术，将冠以鲤鱼β-肌动蛋白基因(CA)启动调控顺序的鲑鱼胰岛素样生长因子I(sIGF-I)的cDNA，即CAsIGFc，注入镜鲤(Cyprinus capiovar.specularis)受精卵内。经聚合酶链式反应(PCR)技术检测，受体胚胎发育各期均携带有外源基因拷贝。在由此发育的5月龄鱼中，80%的个体带有外源基因拷贝。用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测，发现2/3...
家蚕（B. mori）后部丝腺体丝心蛋白 mRNA及其基因克隆，前人已有报道[6,9,11,13]. 本文介绍我们以蓖麻蚕(Attacus ricini）后部丝腺体为材料分离出Poly(A)+RNA，通过反转录途径将mRNA-cDNA杂双链与质粒pBR 322重组，转化大肠杆菌C600，从转化菌中筛选出一株含有插人了外源cDNA片段的重组克隆，并对它进行了初步鉴定。
摘要cDNA微阵列数据中包含许多变异因素，用于检测差异表达基因和其它统计分析前，必须将这些“噪音”剔除。对数比法（背景校正、对数比转换和数据标准化）已经被广泛应用于cDNA微阵列数据分析中，然而这种方法却存在着一些亟待解决的缺陷。对此，提出一种非转换方法。它可免去对数比的转化过程，直接在背景校正后进行数据标准化，可以有效剔除实验“噪音”。研究结果表明：在检测差异表达基因的效率方面，非转换方法比常规...
摘要为克隆马铃薯晚疫病抗性相关基因，深入研究马铃薯晚疫病抗性机制，应用SMART LD-PCR技术,以晚疫病菌混合小种诱导48 h的水平抗性马铃薯（Solanum tuberosum L.）(R-gene-free)叶片为材料，构建了一个富集晚疫病抗性相关基因的cDNA文库。为提高克隆全长cDNA的效率，将cDNA文库与RACE技术结合，依据本实验室得到的病原诱导表达片段测序结果，在其内部设计两个...
摘要培养人高转移肺腺癌细胞系Anip973，构建其cDNA表达文库并转染小鼠成纤维细胞NIH3T3，将经药物筛选后的转染细胞克隆消化为单细胞，接种到软琼脂中培养2周，根据细胞明显的形态学变化挑选出有意义的细胞克隆，扩增再培养，提取DNA，PCR扩增插入片段并进行测序分析。结果表明：软琼脂中挑选出克隆100多个，PCR测序后，得到3个已知基因包括人类核糖体蛋白L23、人类假定蛋白FLJ22104和人...
反转录酶合成cDNA常产生不完全的转录产物。为获得全长的cDNA拷贝并提高它在总cDNA中的比例，已有不少文献提出了一些措施，效果如何尚有争论[3]。我们以人胚肾培养细胞poly(A)+ RNA为模板，参照Maniatis 的方法[5]，建立了一个比较简单易行的反转录程序，合成了较长的cDNA拷贝。