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摘要按DNA-磷酸钙共沉淀法将人白细胞介素2受体(IL-2R)cDNA转染小鼠成纤维细胞L929，经RNA 点琐杂交分析、荧光标记IL-2染色和抗Tac(人IL-2受体α链)特异性玫瑰花环试验，均证明 转入的IL-2R cDNA在L929细胞中表达，其产物具有结合IL-2和抗Tac抗体的能力。本文还报 道了T细胞白血病Jukat细胞和Molt-4等细胞系异常表达IL-2R的结果，并对此作了分析和讨...
人类PKNOX1基因一种新剪接型全长cDNA的克隆与表达分析
基因克隆 差异剪接 Downs综合征 表达谱
2008/1/31
摘要为了寻找新的Down's综合征相关基因，利用生物信息学分析与实验技术相结合的方法，从定位于Down's综合征关键区内（21q22.3）的EST（GenBank登录号H77399）出发，从人类睾丸组织cDNA文库内克隆到含同源盒结构域转录因子PKNOX1的一种新剪接型全长cDNA，命名为PKNOX1B，GenBank登陆号AY142115。PKNOX1B基因跨越58.4 kb，全长cDNA约2....
摘要运用“数据库消减杂交”（Digital Differential Display）方法来筛选人类睾丸特异表达新基因，获得了有差异显示的代表新基因的克隆重叠群，挑选其中一个克隆重叠群HS.129 794进行多组织RT-PCR，初步证实该重叠群在人睾丸中有高表达。然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发，采用生物信息学的方法快速克隆了一个人类新基因的全长cDNA序列，其全长2430 bp,开放阅读框...
正常人体淋巴细胞cDNA文库的构建
cDNA文库 构建 外周血 淋巴细胞
2008/1/3
应用GIBCOBRL建库试剂盒建立了正常人体淋巴细胞cDNA文库。取新鲜的正常人外周血，分离出淋巴细胞，进行体外培养，提取总RNA，纯化mRNA，并将其反转录成cDNA，与SalI和NotI接头连接后插入λZipLox载体，体外包装后转染到Y1090宿主菌中，进行滴度测试及文库扩增。构建的正常人淋巴细胞cDNA文库含2-6×106重组子，克隆效率为5×1012重组子/g cDNA，插入片段长度约为...
摘要 通过生物信息学分析及RT PCR技术 ,从人垂体cDNA文库中克隆到甲状腺素受体相互作用蛋白 15(hTRIP15)的全长cDNA ,长度 1963bp ,编码 4 4 3氨基酸 ,同时克隆该基因不同剪接方式所形成的新的异构体 ,长度 1984bp ,编码 4 50氨基酸 .与基因组序列比较显示该基因具有 12个外显子 ,5号外显子 3′端具有 2个剪切的接点 (-ag) .搜寻UniGen...
人同源框基因Lhx4 cDNA序列的获得,染色体定位和基因组分析
Lhx4基因 染色体定位 运动神经元
2007/12/24
摘要 Lhx4基因是LIM同源框基因家族的一员 ,它在运动神经元的发育过程中发挥着重要的作用 .从人脊髓cDNA文库中筛选到了 1个人源性Lhx4基因的cDNA全长序列 ,它与鼠源性的Lhx4基因的cDNA序列有 92 %同源性 .它的基因被定位在 1号染色体 1q 2 4 .1- 1q 2 4 .3的位置 ,并包含有 6个外显子 .其中同源框结构域由外显子 4和 5表达 ,LIM结构域 1由外显...
人粒细胞集落刺激因子cDNA的克隆、序列鉴定及初步表达
粒细胞集落刺激因子 多聚酶链反应 基因突变 基因表达
2007/12/24
摘要 利用多聚酶链反应技术,从人膀胱癌细胞系5637细胞中快速扩增并克隆了人粒细胞集落刺激因子cDNA,序列分析证明,该cDNA包含人粒细胞集落刺激因子的全部编码基因,全长612bp,编码30个氨基酸的信号肽和174个氨基酸的成熟蛋白。其中第43位codon出现一个碱基的突变(CAC→TAC)导至第43位氨基酸的改变(组氨酸→酪氨酸)。经逆转录病毒导入SP2/0细胞并初步表达。结果表明:该基因产物...
人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达
人胸腺素α原 原核表达 Ｅ－玫瑰花环
2007/12/17
摘要 采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用２０ｕｇ／ｍｌ植物血球凝集素（ＰＨＡ）和５００Ｕ／ｍｌ重组人白细胞介素２（ＩＬ－２）联合刺激人胎儿胸腺细胞，从中提取总ＲＮＡ，经反转录ＰＣＲ获得了人胸腺素α原ｃＤＮＡ；将之克隆入ｐＵＣ１９中，序列测定表明与已报道序列一致，进一步将之亚克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ．观察到在不改变氨基酸编码的前提下，增加胸腺素ａ原上游引物中Ａ、...
人神经生长因子低亲和力受体(p~(75)NGFR)cDNA的克隆及其在神经细胞中表达活性的初步研究
ｐ~（７５）ＮＧＦＲ（神经生长因子低亲和力受体） 逆转录－聚合酶链反应 基因克隆 测序 程序化细胞死亡
2007/12/17
摘要 利用酸性异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法从人胎儿基底前脑中提取总ＲＮＡ，用逆转录与聚合酶链反应相结合的ＲＴ－ＰＣＲ法，扩增出人神经生长因子低亲和力受体ｐ~（７５）ＮＧＦＲ基因ｃＤＮＡ，在限制性内切酶ＳｍａⅠ存在下的连接体系中，将扩增出的ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＵＣ１２的ＳｍａⅠ位或，经限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＰｓｔⅠ酶切鉴定是否插入以及ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定方向。将重组质粒中的ｐ~（７５）ＮＧＦＲ的ｃＤＮ...
人转化生长因子β1 cDNA在COS-7细胞中的表达
人转化生长因子β１ ＣＯＳ－７细胞 短暂表达
2007/12/17
摘要 在测定了ＴＧＦβ１全长序列的基础上，构建了两个ＴＧＦβ１的表达载体ｐＣＭＶβ和ｐＳＶＬβ；分别从转录水平和翻译水平检测了这两个载体在ＣＯＳ－７细胞中的表达。同时利用ＣＯＳ－７短暂表达系统，建立了ＴＧＦβ１的生物测活法；并分别研究了上清收获时间、表达载体、转染方法对ＴＧＦβ１表达的影响