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利用体细胞核移植技术制作人胰岛素原转基因牛 （英文）
体细胞核移植 人胰岛素原 绿色荧光蛋白 转基因牛
2009/6/23
通过体细胞核移植技术制作了人胰岛素原转基因牛。在CMV启动子指导下以内部核糖体进入位点序列（IRES）连接的新霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因组成了双重标记基因的筛选系统，用于转基因细胞的富集以及细胞和植入前胚胎的筛选。转基因通过电穿孔的方法（900 V/cm, 5 ms）转入体外培养的牛胎儿成纤维细胞，基因转染细胞在添加G418(800 μg/mL) 的培养基中培养10天以富集转基因细胞。选择表达...
摘要乙酰辅酶A脱氢酶（ACAD）是由核基因编码存在于线粒体中黄色酶的一个家族，它催化脂肪酸的α和b－氧化，该家族第八成员负责催化缬氨酸分解代谢。本研究中获得了牛的ACAD8基因的mRNA和基因组DNA序列并通过基因组DNA与mRNA的比对确定了其基因结构。其mRNA序列包含一个1,251 bp的开放阅读框，一个37 bp的5′非翻译区和一个444 bp的3′非翻译区；其基因组DNA全长13,814...
牛肾细胞染色体中染色质纤维的包装及RNP的分布
牛肾细胞(BK) 染色体 染色质 核糖核蛋白(RNP)
2008/1/23
应用培养的牛肾(BK)细胞及分离的BK细胞染色体做常规透射电镜样品,经表面舒展技术和临界点干燥制备BK细胞染色体的扫描电镜样品,并结合电镜细胞化学研究了BK染色质纤维的包装及核糖核蛋白(RNP)的分布。观察到BK染色体具有多级双股螺旋结构。在染色体横切面中,可见染色体中央有一低电子密度的无染色质区,该区内有大量RNP物质。在染色质区RNP较少,分布在染色质纤维间,与中央轴区的RNP相连续,表明RN...
一种改进的牛体细胞核移植去核方法
牛 离心 核移植 卵质内注射
2007/12/7
摘要为了提高传统的盲吸法牛体细胞核移植去核效率，将0.5 mL 离心管底部截掉，在截口处蒙上一层400目的细胞筛网，再与1 mL的离心管套在一起。实验1，将成熟的卵母细胞置于改造过的离心管内膜上，分别以1,000 r/min、2,000 r/min及 3,000 r/min离心10 min，Hoechst 33342染色后，在荧光显微镜下计算第一极体与染色体的位置关系及去核效率；实验2，将卵母细胞...
培养条件对牛体外受精胚胎核仁及线粒体发育的影响
体外受精胚胎 发育 核仁 线粒体
2007/8/5
摘要：牛体外受精胚胎分别在SOF+FCS、SOF+BSA和SOF+PVA三种培养系统内进行培养,然后分别取三个系统中发育到原核期、2细胞、4细胞、8细胞、桑椹胚和囊胚阶段的胚胎进行透射电镜的观察,了解培养系统中血清和BSA的添加与否对胚胎发育过程中核仁和线粒体发育的影响.观察结果表明:与已报道的体内受精胚胎研究结果相比,体外受精胚胎核仁的发育比较迟缓,培养系统中血清及BSA的添加与否不会显著影响核...