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中国科学院生物物理研究所专利：流感病毒聚合酶亚基PA氨基端多肽的表达纯化及PA氨基端多肽的晶体结构
中国科学院生物物理研究所 专利 流感病毒 聚合酶亚基 PA氨基端多肽 表达纯化 晶体结构
2023/6/7
中国科学院生物物理研究所专利：流感病毒聚合酶亚基PA氨基端多肽的表达纯化及PA氨基端多肽的晶体结构
围绕农业产业关键蛋白，建成从蛋白质设计、产业化生产到终端应用的完备技术链。可按需改造蛋白质多项性质，规模化收获与纯化蛋白质，并应用于多种农业产业场景。主要技术包括：蛋白质的非理性定向进化、半理性改组工程改造与理性蛋白质工程改造；外源基因在原核生物、酵母、昆虫细胞与无细胞体系等中高效表达与中低压层析纯化；蛋白质结晶与X-衍射结构解析；蛋白互作检测；快检试纸研发与制备技术等。广泛应用于农业病原分析检测...
人可溶性生长刺激表达基因2蛋白的真核表达、纯化和鉴定
人可溶性生长刺激表达基因2蛋白 真核表达 蛋白质纯化
2021/3/29
构建人可溶性生长刺激表达基因2（sST2）蛋白的重组真核表达载体，获得高纯度的人sST2重组蛋白。 方法：根据人sST2基因序列设计引物，利用RT-PCR技术获得人sST2基因；构建人sST2-pcDNA3.1-his（-）重组真核表达载体；脂质体法转染COS7细胞，表达人sST2重组蛋白，并用镍柱亲和层析法纯化；用western blot和ELISA法对人sST2重组蛋白进行鉴定。
中华按蚊谷胱甘肽-S-转移酶E6（AsGSTE6）的表达纯化与结晶
中华按蚊 谷胱甘肽-S-转移酶 AsGSTE6 原核表达 纯化 结晶
2018/7/20
【目的】对中华按蚊Anopheles sinensis谷胱甘肽-S-转移酶E6（AsGSTE6）进行初步晶体学研究，为深入研究其空间结构奠定基础。【方法】利用生物信息学软件，首先对中华按蚊AsGSTE6进行生物信息学预测和分析；然后进行分子克隆，构建重组子pET28a-AsGSTe6；利用大肠杆菌Escherichia coli原核表达系统进行诱导表达；采用Ni-NTA金属螯合层析和葡聚糖凝胶层析...
【目的】本文在前期获得绿盲蝽Apolygus lucorum磷脂酶C基因(AlPLC)的基础上，明晰AlPLC基因在绿盲蝽不同日龄若虫中的表达特征，阐明AlPLC重组蛋白的酶学性质。【方法】qRT-PCR法分析1-13日龄绿盲蝽若虫AlPLC的表达量；构建含有AlPLC基因的原核表达载体pCzn1-AlPLC；进一步将该表达载体经IPTG诱导表达和蛋白纯化，获得具有磷脂酶活性的重组蛋白；以p-NP...
【目的】羧酸酯酶（carboxylesterase, COE）是昆虫体内一类重要的解毒酶，与昆虫的抗药性相关。本研究旨在对中华按蚊Anopheles sinensis羧酸酯酶Ae7(Asae7)进行初步晶体学研究，为解析AsAe7的空间结构及探讨其分子功能奠定基础。【方法】首先对Asae7进行生物信息学分析，然后进行分子克隆，并利用原核表达系统在体外对Asae7进行重组表达；结合Ni-NTA金属螯...
首先采用TA克隆技术克隆建鲤组织蛋白酶L(Cathepsin L,CAT L)成熟肽基因片段并进行双酶切鉴定,进而构建表达载体CAT L-p ET-30a并转入宿主菌E.coli BL21,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)在37℃诱导2 h表达重组CAT L蛋白。而后经尿素梯度洗涤和镍离子亲和层析纯化目的蛋白,并利用SDS-PAGE检测诱导效果和纯化过程。最后以荧光合...
【目的】克隆表达炭疽芽胞杆菌BlsA 的功能区片段并对其生物学功能进行鉴定。【方法】以炭疽芽胞杆菌A16R 基因组DNA 为模板PCR扩增bslA(260－652)基因片段，克隆至pET-28a(+)载体。将成功构建的重组质粒转化入大肠杆菌Rosetta (DE3)中，诱导表达后收集菌体经超声破碎后，对可溶表达部分用镍柱进行亲和层析纯化。以纯化后的蛋白为抗原，免疫BALB/c小鼠制备该蛋白的多抗，...
为研究细胞穿透肽TAT融合小鼠存活素T34A (survivinT34A)重组蛋白(TAT-msvT34A)转导细胞的效能， 该实验将表达TAT-msvT34A的原核表达载体pTAT-msvT34A转化大肠杆菌表达株E.coli BL21(DE3)， 异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导， 表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。通过亲和层析、离子交换柱层析、分子筛等步骤纯化， 得到TAT-msvT34...
气味结合蛋白在昆虫对寄主挥发性气味识别过程中有着重要的生理功能。本研究通过对草地螟Loxostege sticticalis L. 普通气味结合蛋白Ⅰ（Lsti-GOBP1）进行克隆及原核表达的基础上, 分离纯化得到体外重组的Lsti-GOBP1蛋白。并利用N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine, 1-NPN）作为荧光探针研究了Lsti-GOBP1蛋白与醇类、 醛类、...
重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定
人蛋白激酶CK2β亚基 表达载体pT7-7 原核表达 蛋白质纯化 酶动力学分析
2008/6/3
将构建成功的人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的重组质粒, 转化大肠杆菌BL21 (DE3), 在IPTG诱导下表达. 表达蛋白大多数以不溶形式存在. 6L(约10.2 g)表达菌抽提得到约20 mg的可溶性表达产物, 通过P11磷酸纤维素一步层析分离, 得到6.8 mg纯化蛋白. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量26 ku的单一蛋白带.蛋白质印迹结果证明：纯化的表达产物与抗人...
人口腔癌症缺失相关蛋白（DOC-1R）的表达、纯化和晶体生长
蛋白 癌症缺失 人口腔
2008/5/19
口腔癌缺失(Deleted in Oral Cancer-1, DOC-1)基因是近年来被证实的口腔癌中口腔癌缺失（Deleted in Oral Cancer-1, DOC-1）基因是近年来被证实的口腔癌中具有抑癌作用的基因。1999年，研究人员通过酵母双杂交实验又发现了与DOC-1相关的另一候选抑癌基因DOC-1R（DOC-1 related）。以往的很多实验表明，这两个蛋白无论序列还是功能上...
融合干扰素-BLA（IFN-BLA）的构建、表达、纯化及抗病毒活性测定
IFN-BLA 表达 纯化 抗病毒活性
2008/1/30
摘要干扰素-BLA(IFN-BLA)由干扰素-beta-1b(IFN-beta-1b)和干扰素-alpha-2b（IFN-alpha-2b）通过连接肽-GGGS-融合而成。优化了其在大肠感菌BL21 CodonPlus (DE3)-RIL中的实验室表达条件，表达的目的蛋白占菌体总蛋白的35％以上并且主要以包涵体的形式存在。对包涵体的复性条件进行了摸索，建立了IFN-BLA的复性及纯化方法，纯化后的...
小鼠骨保护素配基胞外片段的表达、纯化及生物活性分析
骨保护素配基 表达 纯化 大肠杆菌
2008/1/25
摘要 骨保护素配基（OPGL）是调节破骨细胞分化和成熟的核心细胞因子。由小鼠骨组织提取总RNA，RT-PCR扩增得到小鼠OPGL胞外片段(sOPGL) cDNA，以特定策略克隆入表达载体pET-42a(+)，以便使未来表达产物的融合标签序列能够完全被因子Xa切除。重组载体在大肠杆菌中诱导表达可获得高水平的47 kD产物，Western Blotting证实它可被OPGL抗体识别。经Glutathi...
转录因子XBP1的融合表达、纯化及多克隆抗体的制备
人X盒结合蛋白1(XBP1) 融合表达 多克隆抗体
2008/1/5
摘要 人X盒结合蛋白 1(XBP 1)为一种转录因子 ,与多种肿瘤的发生、发展有密切关系 .XBP 1有2种剪切形式 ,即XBP 1S和XBP 1U .将这 2种剪切形式中的一段相同编码序列 (编码 82～ 14 7位氨基酸 )重组于谷胱甘肽S转移酶 (GST)融合蛋白表达载体pGEX KG中 ,构建成重组质粒pGST XBP 1(82～ 14 7位氨基酸 ) .将该重组质粒转化E .coliDH...