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转mapk双链RNA 表达载体黄瓜对土壤线虫多样性的影响
促分裂原活化蛋白激酶 土壤线虫 18SrDNA 黄瓜 转基因 生物安全性
2020/1/3
为了评价转mapk 双链RNA 表达载体黄瓜的生物安全性，明确其对根际土壤线虫多样性的影响，采用18S rDNA 基因克隆文库方法对转mapk 双链RNA 表达载体黄瓜和非转基因黄瓜根际土壤线虫多样性进行研究。结果表明，转基因黄瓜和非转基因黄瓜根际土壤线虫均以食细菌线虫为主，其中小杆线虫属、头叶线虫属、拟丽突线虫属为优势属。转基因和非转基因黄瓜根际土壤线虫多样指数和生态指数无显著差异，表明转map...
根结线虫是番茄上的重要土传病害，选育抗根结线虫品种是最有效的防治方法，但是目前转育到栽培番茄中的抗根结线虫基因Mi-1 在土温高于28 ℃时就丧失了抗性。本试验利用热稳定抗根结线虫野生番茄材料LA2157，根据Mi-1 基因的序列信息，对其中热稳定抗根结线虫Mi-9 基因进行同源克隆，在LA2157 中共获得2 个候选基因片段；通过In-Fusion 克隆技术，将候选基因与过表达载体pBI121 ...
通过构建中国水仙锌指蛋白基因NtPLATZ1正义和反义两种植物表达载体，并用冻融法将其导入农杆菌EHA105菌株，介导遗传转化烟草，对遗传转化的烟草再生植株进行PCR-Southern blot和RT-PCR检测，研究NtPLATZ1的功能。结果表明成功将NtPLATZ1转化烟草，获得5株阳性转基因植株。NtPLATZ1在转基因烟草中过表达能抑制烟草的生长，抑制表达可促进烟草生长。
山茶花CjAPL1基因正义表达载体的构建及对拟南芥的转化分析
山茶花 CjAPL1基因 表达载体 转基因表达
2014/6/13
为研究山茶花CjAPL1基因对于重瓣花形成的作用，构建了pCAMBIA1300-CjAPL1正义植物表达载体，酶切结果显示，CjAPL1基因正向插入pCAMBIA1300的启动子和终止子之间，表明CjAPL1植物表达载体构建成功。将pCAMBIA1300-CjAPL1采用农杆菌介导的花序浸染法转化拟南芥，获得转基因阳性植株65株。随机挑选表型变异明显的3株进行PCR扩增都得到了目的条带，South...
小菜蛾类钙粘蛋白片段的原核融合表达载体构建及其条件优化
小菜蛾 钙粘蛋白 原核表达 优化
2018/6/28
构建了小菜蛾钙粘蛋白片段基因的重组载体，为提高其在大肠杆菌中的表达量，研究了时间、温度、IPTG浓度对融合蛋白表达量以及可溶性的影响。结果表明，使用LB培养基37℃培养1.5h后，采用终浓度为0.1mmol·L-1的IPTG，在25℃180r·min-1诱导培养36h融合蛋白的表达量最大，并且温度的改变对融合蛋白的可溶性几乎没有影响，SDS-PAGE电泳检测结果表明，融合蛋白的分子质量与预计大小一...
结球甘蓝春化相关基因VIN3反义植物表达载体构建及转化
结球甘蓝 VIN3 春化作用 反义表达载体
2018/9/29
以pBI121植物表达载体和BoVIN3-1基因片段为基础，构建结球甘蓝春化相关基因VIN3反义植物表达载体。将BoVIN3-1基因片段反向插入355启动子与GUS基因之间的限制性酶切位点XbaⅠ和SmaⅠ中，构建含反义BoVIN3-1基因的工程质粒pBI35S-BoVIN3-1。通过花蕾微量注射法转化结球甘蓝，获得9株转化植株。PCR检测结果表明，其中5株为阳性植株，阳性株率55.6%。经春化处...
Cry2Aa2 和PamPAP 双价表达载体的构建及其对辣椒的遗传转化
辣椒 PMI/甘露糖筛选体系 Cry2Aa2
2012/10/16
为了获得既抗虫又抗病毒病，又对人体和环境安全的转基因辣椒（Capsicum annuum L．）材料，将启动子CaMV35S、终止子Nos-ter 及缺失无毒型商陆抗病毒蛋白基因PamPAP 一起插入到植物表达载体pCAMBIA1301-Cry2Aa2-PMI 的多克隆位点上，构建双价表达载体，采用农杆菌介导法将其转入辣椒中，并用PMI/甘露糖筛选体系对转化植株筛选。经PCR 扩增和Souther...
黄瓜Rubisco活化酶基因CsRCA表达载体构建与遗传转化
黄瓜 核酮糖&ndash 15&ndas
2012/10/17
核酮糖–1,5–二磷酸羧化/加氧酶（Rubisco）是光合碳循环中的关键酶，为了探明其在植物体内的活化机制，用农杆菌介导法将Rubisco活化酶（RCA）基因CsRCA导入黄瓜，分别用PCR、real-time PCR和Western杂交法进行分子检测，分析转基因植株的表达量。酶切鉴定结果显示，CsRCA正向插入植物表达载体pCAMBIA1301的CaMV 35S启动子和NOS终止子之间，成功构建...
芥菜开花调控蛋白SVP与FLC酵母表达载体的构建及其相互作用研究
芥菜 SVP FLC 酵母双杂交
2012/10/17
为深入研究芥菜开花信号整合子的两个核心调节因子SHORT VEGETATIVE PHASE（SVP）与FLOWERING LOCUS C（FLC）相互作用的分子机理，通过PCR扩增，从芥菜材料‘QJ’中分别克隆含EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切位点的SVP和FLC编码区全长，并利用酵母双杂交体系，将FLC与GAL4报告基因DNA 激活域融合（pGADT7FLC），SVP与GAL4报告基因DNA 结合域...
为了获得黄瓜中ClpP基因的cDNA全序列，研究其与黄瓜芽黄突变现象的关系，本研究采用TRNzol法提取芽黄突变的黄瓜叶片总RNA，并以其为模板反转录合成cDNA第一链。根据NCBI预测的黄瓜ClpP基因序列设计并合成1对特异引物，通过PCR扩增得到目的条带后测序，并构建植物表达载体；成功获得黄瓜中ClpP基因的cDNA全序列，并提交到NCBI。该基因编码区全长495 bp，共编码氨基酸158个。...
本研究以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子双链RNA（dsRNA）为目标，根据已报道的TMV ΔMP和CMV ΔRep的核苷酸序列设计特异性引物，分别从质粒pBIN-TMV ΔMP(i/r)、pBIN-CMV ΔRep(i/r)扩增MP基因、Rep基因，并在pGEM-T Easy 载体上将2片段串联起来，再用PCR扩增串联好的正反向MP-Rep基因。正向MP-Rep基因用BamHI和Kpn ...
【目的】克隆甘蓝型油菜（Brassica napus）油体钙蛋白（caleosin）基因BnClo1,并进行原核表达研究。【方法】在获得甘蓝型油菜BnClo1基因全长cDNA的基础上,根据BnClo1基因编码区设计1对特异引物,以甘蓝型油菜种子总RNA为模板,通过RT-PCR获得了约750 bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段克隆到原核表达载体pTYB12中...
[ 目的] 克隆花特异表达启动子PchsA, 将此启动子与蓝色基因“F3′5′H”构建新的表达载体, 拟以该启动子驱动“F3′5′H”在其他花色中特异表达。[ 方法] 根据GenBank 报道的矮牵牛启动子的序列设计并合成一对特异引物, 以蓝紫色矮牵牛总DNA 为模板, 用PCR 仪扩增目的片段。[ 结果] PCR 扩增出的启动子DNA 片段长约550 bp , 回收后连接到PGM- T 质粒载体...
猕猴桃果实特异表达异戊烯基转移酶基因植物表达载体的构建
猕猴桃 植物表达载体 猕猴桃素基因启动子 异戊烯基转移酶基因
2009/5/12
以pBI121 质粒为载体, 将猕猴桃素基因启动子与ipt 编码基因连接, 构建猕猴桃果实特异表达ipt 嵌合基因。