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该研究旨在建立锌指核酸酶介导的多位点基因打靶技术, 为获得稳定遗传的转基因动物或基因治疗临床应用解决技术难题. 首先利用OPEN 平台设计、构建能识别人基因组内rDNA基因间隔序列的锌指蛋白基因序列, 与FokⅠ的切割结构域连接、表达后获得锌指核酸酶基因,再构建锌指核酸酶真核表达载体. 另外, 构建含有2 条同源重组引导序列和绿色荧光蛋白基因(EGFP)的多位点基因打靶载体. 将锌指核酸酶真核表达...
摘要为了在小鼠胚胎干细胞(ES)中引起神经细胞cdc2类激酶调节亚基p35NcK 5a基因的定点重复,采用常规的分子克隆技术,构建得到长约12.2kb的基因重复性打靶载体pGDTV。用电穿孔法将线性化的pGDTV载体转入ES细胞,经过G418和GANC分组药物选择,获得245个双药物抗性的细胞克隆,细胞存活率为6.22×10 E-5。经PCR和基因组Southern杂交鉴定,2个ES细胞克隆发生了...