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本发明涉及一种同时制备毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷化学对照品的制备新工艺。黄芪醇提物，经硅胶柱色谱富集、树脂柱除杂、制备高效液相色谱三步纯化，即可获得纯度大于98％的毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷两种化学对照品。本发明工艺步骤简单、纯度高、色泽好，并且易规模化生产。