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中国农业科学院棉花研究所专利：一种亚洲棉原生质体的分离与外源基因转化的方法
亚洲棉 原生质体分离 外源基因 转化方法
2024/5/13
本发明公开了一种亚洲棉原生质体分离与外源基因转化的方法。该方法包括亚洲棉种子萌发、酶解分离原生质体、离心收集原生质体、培养、外源基因转化及显微观察鉴定等步骤。本发明黑暗环境中生长的叶片所分离的原生质体浓度符合实验需求且完整度高，可得到完整的转化成功的原生质体。因此本发明得出的利用黑暗环境培养的叶片分离原生质体方法，更好地解决了亚洲棉原生质体分离及外源基因转化的难题。亚洲棉原生质体分离及外源基因成功...
中国农业科学院棉花研究所专利：一种棉花原生质体制备方法
棉花 原生质体 制备方法
2024/4/11
本发明提供了一种棉花原生质体制备方法，属于植物细胞生物学技术领域，包括如下步骤：(1)取棉花花朵，用刀片将花瓣切成细丝；(2)将细丝置于6孔细胞培养板中，每孔放一个花瓣的量，每孔加入5-8ml酶解液，之后酶解；(3)酶解结束后对酶解反应液进行过滤；(4)取滤液加入离心管，第一次离心；(5)用枪头吸去离心管内的上清，向原生质体沉淀中加入第一W5溶液，第二次离心，再次用枪头吸去上清，然后再加入第二W5...
本发明属于原生质体制备技术领域，具体涉及猕猴桃原生质体提取液和猕猴桃原生质体及其制备方法和应用。每升本发明所述猕猴桃原生质体提取液中，包括1.3％～2％W/V混合酶液，300～900mM甘露醇，50～65mM CaCl 2 ，1～2mMDTT和10～20mM MES；所述混合酶液包括纤维素酶R?10和果胶酶Y?23。利用本发明猕猴桃原生质体提取液对猕猴桃果肉进行酶解，能够缩短酶解时间，使制备的原生...
近日，中南林业科技大学、岳麓山实验室刘高强课题组在分析化学领域权威期刊Analytical Chemistry（中科院一区Top，IF：8.008）发表了题为“Non-Destructive and Quantitative Analysis of Cell Wall Regeneration in Medicinal Macrofungus Ganoderma lingzhi by Membra...
中国科学院植物研究所科研人员建立了一种适用单细胞转录组测序的原生质体提取方法（图）
单细胞转录 原生质体
2022/11/11
单细胞转录组测序（Single-cell RNA sequencing）是2022年来兴起的在单细胞水平进行测序的新技术，可以在单细胞水平上重建组织的转录地形图、鉴定不同细胞类型和重建细胞谱系的发育轨迹，对深入理解细胞分化和相关调控网络有着极大的促进作用。从植物组织中释放高质量的原生质体是单细胞转录组测序的前提。然而，由于植物细胞通常由致密的细胞壁所包裹，并且细胞壁在物种间以及不同组织间差异巨大，...
单细胞转录组测序（Single-cell RNA sequencing）是近年来兴起的在单细胞水平进行测序的新技术，可以在单细胞水平上重建组织的转录地形图、鉴定不同细胞类型和重建细胞谱系的发育轨迹，对深入理解细胞分化和相关调控网络有着极大的促进作用。从植物组织中释放高质量的原生质体是单细胞转录组测序的前提。然而，由于植物细胞通常由致密的细胞壁所包裹，并且细胞壁在物种间以及不同组织间差异巨大，使得单...
甘蓝原生质体制备体系优化及瞬时转化体系的建立
甘蓝 原生质体 瞬时转化 正交设计 CRISPR/Cas9
2021/4/8
为研究甘露醇浓度、酶解时间、离心力大小和不同外植体对原生质体产量和活力的影响，采用正交试验方案对甘蓝原生质体制备体系进行了优化，并建立了甘蓝原生质体的瞬时转化体系，同时利用该体系对甘蓝CRISPR/Cas9基因编辑系统进行了初步研究。结果表明：以下胚轴为材料，酶液组成为1%纤维素酶+0.5%离析酶+0.6 mol/L甘露醇+10 mmol/L MES+1 mmol/L CaCl2+0.1% BSA...
水稻矮缩病毒Pns6和P8蛋白在病毒侵染水稻原生质体后的表达
水稻矮缩病毒 水稻原生质体 Pns6蛋白 P8蛋白
2019/10/28
【目的】为明确水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus, RDV) Pns6和P8蛋白在病毒侵染水稻原生质体后的表达动态，【方法】利用PEG介导的病毒侵染原生质体体系，通过免疫荧光和电镜技术分析Pns6、P8蛋白以及病毒粒体在水稻原生质体中的定位；同时，通过Western blot和实时荧光定量PCR分析Pns6和P8蛋白及其RNA在水稻原生质体中的积累量。【结果】病毒接种水稻原生质体48 ...
为了提高褐色双孢蘑菇原生质体产量和再生率,本研究以褐色双孢蘑菇棕秀一号为材料,利用Design-Expert 8.0.6软件进行二次回归分析对褐色双孢蘑菇制备原生质体的条件进行优化。结果表明,原生质体最佳制备条件为溶壁酶1.35%、蜗牛酶7.01%、酶解温度30.4℃、褐色双孢蘑菇菌丝体菌龄8.36 d、酶解时间3.00 h,在此条件下原生质体产量高达4.39×107 个·mL-1;当溶壁酶含量为...
蚌埠医学院蛋白质与酶工程课件第6章 酶、细胞、原生质体固定化
蚌埠医学院 蛋白质与酶工程 课件 第6章 酶、细胞、原生质体固定化
2017/11/14
蚌埠医学院蛋白质与酶工程课件第6章 酶、细胞、原生质体固定化。
雷公藤悬浮细胞原生质体的制备及瞬时转化体系的建立
原生质体 悬浮细胞 瞬时转化 雷公藤
2018/6/19
为探索药用植物雷公藤(Tripterygium wilfordii)悬浮细胞原生质体提取的最优条件, 并建立雷公藤原生质体瞬时转化体系, 以雷公藤悬浮细胞为材料, 对酶解液配比、酶解时间、甘露醇浓度及处理转速进行考察。用PEG介导的瞬时转化法将外源基因转化到雷公藤原生质体中。结果表明, 以雷公藤悬浮细胞为材料提取原生质体的最佳条件是酶液配比为2.0%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.5%离析酶, 甘露...
非洲菊原生质体制备及瞬时转化系统的建立
非洲菊 原生质体制备 瞬时表达 蛋白互作
2018/6/20
非洲菊(Gerbera hybrida)已成为研究复杂花序进化与发育的模式植物。以非洲菊无菌组培苗叶片为材料, 分析不同浓度纤维素酶及离析酶配比对非洲菊原生质体提取效率的影响, 建立了稳定、高效的非洲菊原生质体提取与瞬时转化体系。结果表明, 以2.0%纤维素酶+0.3%离析酶组合, 在0.4 mol·L–1甘露醇溶液中, 酶解4小时, 酶解温度为25°C, 得到产量高达2.2×107个·g–1 F...
棉花保卫细胞原生质体的有效分离与活性鉴定
棉花 保卫细胞 原生质体 K+电流
2018/12/26
模式植物拟南芥保卫细胞原生质体的分离技术已得到应用, 然而如何有效分离和纯化棉花保卫细胞原生质体, 已成为棉花气孔运动调控机理研究的限制因素。本文探索了一种棉花保卫细胞原生质体分离和活性鉴定的方法。我们选取生长2~3周的棉花幼叶下表皮, 利用1.3%纤维素酶和0.03%果胶酶进行一步酶解约1.5 h, 先低速15×g离心5 min, 再高速105×g离心10 min分离, 所获得保卫细胞原生质体的...
【目的】水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus, RRSV) Pns10蛋白在介体昆虫细胞内可形成类似病毒原质(viroplasm)的内含体，是RRSV侵染介体所必需。然而Pns10蛋白在水稻寄主中是否具有类似功能及其表达情况如何未见报道。【方法】利用大肠杆菌系统表达Pns10蛋白，免疫家兔制备多克隆抗体；通过水稻原生质体病毒侵染体系，利用免疫荧光技术分析Pns10蛋白在...