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本发明涉及一种四齿β二酮配体-铕（Ⅲ）荧光配合物及制备和应用。四齿β-二酮类配位体含有1,3二苄基苯骨架结构和能与蛋白等生物分子直接共价键和反应的活性基团，可与三价金属铕离子形成长寿命的强荧光性配合物，用作荧光探针进行时间分辨荧光测定，以降低各种散乱光和短寿命荧光的干扰，在蛋白质、氨基酸、多肽、核酸等的时间分辨荧光测定及显微成像等生化领域有重要应用前景。