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反义寡核苷酸pH敏前体脂质体的制备及性质分析
pH敏前体脂质体 pH敏脂质体 反义寡核苷酸
2008/9/10
为了提高反义寡核苷酸的稳定性和生物利用度及避免在溶酶体内降解，采用旋转蒸发-薄膜水化、超声-挤压、冻干三步法完成pH敏前体脂质体的制备，研究了体外释药规律；以反义寡核苷酸为实验对象，测定了包封率.制得的pH敏前体脂质体复水后形成的pH敏脂质体形态圆整，粒径12.3～389.9 nm范围内，平均粒径为22.7 nm；三批pH敏脂质体的平均包封率为68.3%；体外释药方程为Q=1.8382－2.518...
反义寡核苷酸可作为基因表达的抑制剂和潜在的治疗药物，但多种类型的寡核苷酸为聚阴离子化合物，难以跨过细胞膜.已知包括融合肽、信号肽在内的多种生物活性多肽具有跨膜与核定位能力.讨论了反义寡核苷酸-肽缀合物的合成和生物活性.
质谱在寡核苷酸药物质量控制中的应用
寡核苷酸 质谱 质量控制
2008/6/5
介绍了质谱在寡核苷酸质量控制方面的应用.合成寡核苷酸及类似物作为反义治疗剂在病毒感染和一些癌症治疗方面有良好的前景.寡核苷酸作为药物，其结构特性必须进行确证.寡核苷酸浓度和纯度的分析可使用色谱或电泳技术，对寡核苷酸的碱基组成、序列、同一性，修饰基团，色谱或电泳分析方法无能为力.质谱的高鉴别能力使其能有效、灵敏、快速和精确地确定寡核苷酸的这些特性.
摘要对寡核苷酸DNA Microarray用于HLADRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚/氯仿法提取标准血样基因组DNA,在DRB1的exon2区域设计一对引物,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5-dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针,将探针固定在APS-PDC法制作的DNA Microarray上,用标记的PCR产物与之杂交,扫描仪对杂交结果进行扫描,Imagene软件对杂交图象进行分析...
摘要在人或动物的基因组中，存在着类似于小卫星DNA的简单衔接重复单位，如(GACA)4、(GATA)4、(TCC)5、(CA)6和(CAC)，等，由于这些重复单位在人或动物基因组中出现的数目和频率不同而表现出多态性。本文用人工合成的寡核苷酸探针(CAC)5/(GTG)5，调查了北京地区的50名无关个体，经过统计学处理，计算出无关个体的相关机率是3.8×10-10；此外还对2个家系中的11名成...
摘要多重可扩增探针杂交技术(multiplex amplifiable probe hybridization,MAPH)是近年来发展起来的一种用于基因组中DNA拷贝数检测的新技术。并发展了一种基于寡核苷酸微阵列芯片的MAPH技术。 该方法根据所检测的DNA序列，制备若干具有通用引物的PCR产物作为可扩增探针组，与固定在尼龙膜上待测的基因组DNA杂交。用磁珠回收特异性杂交的探针，经生物素标记的通用...
摘要此前发现Smad3基因敲除小鼠（Smad3ex8/ex8）的关节软骨细胞异常肥大分化，出现类似于人类骨关节炎的表型。为了进一步明确转化生长因子-b（TGF-b）/Smad3信号通过调节哪些靶基因的表达来抑制关节软骨细胞的肥大分化，以及研究骨关节炎发病的分子机制，利用寡核苷酸芯片技术分析了5日龄Smad3基因敲除小鼠与野生型对照小鼠关节软骨细胞基因表达谱的改变。通过对差异表达基因的分析，发现在S...
摘要 利用寡核苷酸芯片检测方法分析CYP1A1单核苷酸多态性（SNP）和GSTM1缺失与否，实验结果证明了寡核苷酸芯片技术可并行、准确、高效地检测基因的单核苷酸多态性和其他类型的基因多态型，可为疾病遗传易感性及单体型的研究提供强有力的研究工具。采用该寡核苷酸芯片，检测了84份正常人的血液DNA样本，其中GSTM1基因缺失率达到47.6%，接近报道数值。统计分析发现CYP1A1 m1-m2的3种基...
摘要 结核病仍然是人类健康的主要威胁，结核分枝杆菌诱导的巨噬细胞凋亡是宿主防御反应之一，研究凋亡相关基因的差异表达有助于认识结核分枝杆菌致病机理和发现新的药物靶标。利用包括19 200个基因或基因片段的DNA芯片研究巨噬细胞株U937对临床和实验室菌株感染的差异表达，Northern blotting 和RT-PCR验证了芯片研究结果。Mtb H37Rv感染下调bcl-2,vitaminD受体、干...
检测绵羊BMPR-IB基因多态性寡核苷酸芯片的制备
寡核苷酸芯片 BMPR-IB 基因 基因多态性 中国美利奴羊
2008/1/12
摘要FecB基因是控制中国美利奴羊排卵率和产羔数的主效基因，由于A746G的点突变而导致绵羊表型的变化。本研究的目的在于根据FecB基因的多态性，制备寡核苷酸芯片检测绵羊FecB基因的单核苷酸多态性（SNP），设计六条特异性的探针，用基因芯片点样仪将探针点样到醛基修饰的载玻片上，采集绵羊的血液样本，在芯片反应舱中，检测FecB基因A746G点突变，设计对应的软件进行判读，分析检测结果，与PCR-R...
摘要 来自不同人的染色体DNA经聚合酶链反应(PCR)将其HLA-DQα基因的多态区242bp人工地扩增30个循环。用1/10扩增产物点在尼龙膜上。将四种不同的等位基因特异的寡核苷酸(ASOs)经Bio-11-duTP进行3'末端标记得生物素探针。以此探针对不同扩增标本做狭缝印迹杂交。结果表明用此种非放射性的方法能探测出人白细胞表面抗原DQα基因的微多态性,从而得到不同个体的基因型。ASO分型是对...
用改进的寡核苷酸诱导突变法改造人胰岛素前体基因
寡聚核苷酸 突变 人胰岛素前体的C肽
2008/1/4
摘要 我们用改进了的寡聚核苷酸诱导突变法,将两个单一限制性内切酶位点引入人胰岛素前体B链与C链连接处附近,及C链与A铁连接处附近。用含U模板法将B链第30个残基密码子ACC改成ACG,从而引入MluⅠ位点。用修改了的缺口双链DNA突变法,将A链第4个残基密码于GAG改成CTG,引入了一个PstⅠ位点。突变效率的为17％-36％。这个突变体在人胰岛素前体结构及蛋白质折叠的研究中,将有利于更换不同的C...
基因芯片制作中寡核苷酸共价固定方法研究进展
寡核苷酸 基因芯片 载体
2007/12/22
摘要 寡核苷酸在固体支持物如玻璃、硅片、尼龙或塑料表面的牢固、密集、有规律 的离散固定是基因芯片制作技术的关键步骤。综述了国内外寡核苷酸在固体支持物 表面共价固定的主要方法。