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研究应用 siRNA抑制Nrf2基因表达后对乙酸铅染毒所致TK6细胞凋亡和氧化应激的影响。方法 体外培养 TK6细胞,设正常组、阴性对照组及 Nrf2-siRNA1、Nrf2-siRNA2、Nrf2-siRNA3转染组。Western blot验证转染效果,筛选出干扰效果最佳序列。采用 480 μmol/L的乙酸铅染毒TK6细胞,运用流式细胞技术、2',7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)...
探讨siRNA沉默CD99基因表达对髓母细胞瘤细胞系DAOY细胞增殖和凋亡的影响。方法 利用CD99 siRNA转染髓母细胞瘤DAOY细胞,细胞分为沉默1组(转染CD99 siRNA-1#)、沉默2组(转染CD99 siRNA-2#)、对照组(转染siRNA阴性对照),采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测沉默效果。利用CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细...
探讨沉默TRIM29基因表达对鼻咽癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:将人鼻咽癌5-8F细胞分为空白组、阴性对照(NC)组(转染阴性对照siRNA)和si-TRIM29组(转染TRIM29的特异性siRNA),通过CCK-8法检测si-TRIM29转染5-8F细胞0~96 h的细胞活力。通过流式细胞术及Western blot分别检测si-TRIM29转染5-8F细胞48 h的细胞凋...
探讨敲减IQGAP1基因表达对脑胶质瘤细胞侵袭、迁移及免疫抑制的影响及机制。方法:将人脑胶质瘤U251细胞随机分为空白组、阴性对照组和si-IQGAP1组,AG490作为STAT3信号通路抑制剂。转染48 h后,MTT法检测细胞活力;Western blot检测IQGAP1、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、STAT3和p-STAT3的蛋白水平;Transwell小室...
探讨小干扰RNA干扰VRK1表达对食管癌细胞株BANF1蛋白的表达及其增殖迁移能力的影响。方法 将VRK1 siRNA转染EC109和EC1细胞系干扰VRK1的表达, Western blot法检测VRK1siRNA干扰效率及siRNA干扰后食管癌细胞BANF1的表达。CCK-8实验和流式细胞术检测干扰VRK1表达后对细胞增殖能力的影响,Transwell细胞体外侵袭实验观察干扰前后细胞迁移能力的...
研究辐射对人胚肺成纤维细胞HFL-1的基因表达及对转化生长因子β1 (TGF-β1)的影响,探讨TGF-β1 siRNA对受照HFL-1细胞胶原合成的干预作用。方法 将HFL-1细胞分为单纯照射组和空白对照组,予6 MV X射线500 cGy单次照射,照后24 h以基因芯片法分析两组基因表达差异及TGF-β1的表达差异; 将HFL-1细胞分为单纯照射组、阴性对照siRNA组和TGF-β1 siRN...
探讨DKK1 siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法 瞬时转染DKK1 siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞;应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt/β-catenin信号通路中活性β-cate...
探讨靶向rhlI基因的siRNA分子对豚鼠体内铜绿假单胞菌生物膜感染的抑制作用。方法 应用气管注入法制备铜绿假单胞菌生物膜感染豚鼠模型,18只豚鼠模型随机分成3组,分别经尾静脉注射siRNA分子(50 μg·mL-1)与脂质体混合物(siRNA组)、乳酸环丙沙星(环丙沙星组)或生理盐水(对照组)。检查肺和支气管组织病理改变。取左肺组织匀浆和支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细菌学检查。结果 siRN...
siRNA体内递送的研究现状     RNAi  siRNA  体内递送  载体  临床试验       2014/2/25
RNAi是用来沉默特定基因的一个强有力的研究工具,并为基因治疗策略带来新希望。目前已经用于治疗肿瘤、乙型肝炎、老年性黄斑变性等疾病。RNAi的效应分子为小分子干扰RNA(siRNA),然而裸siRNA自身具有电负性、分子量大、极性强、半衰期短,以及容易被内源酶降解和肾小球滤过等缺陷,使其临床应用受到极大的限制。如何通过对siRNA进行化学修饰和载体构建,包括运用病毒性载体和非病毒性载体,以提高si...
构建P75 特异小干扰RNA(siRNA) 表达载体,并观察其对神经生长因子(NGF) 促乳腺癌细胞生长及凋亡的影响。 方法 通过GenBank提供的P75 mRNA序列,设计3对能转录短发夹状RNA的DNA序列,构建pSilencer?4.1-CMV neo质粒重组载体,转染乳腺癌SKBR3细胞;通过实时荧光定量PCR和Western blot筛选RNA干扰效果最强的干扰片...
构建共表达绿色荧光蛋白( green fluorescent protein,GFP)基因和人磷酸葡萄糖异构酶(phosphoglucose isomerase, PGI)基因的慢病毒载体,初步探讨干扰人PGI基因对白血病细胞增殖的影响。 方法 RT-PCR、Western blot 检测人单核细胞、K562、KG1-α、HL-60细胞中PGI mRNA和蛋白表达水平,筛选高...
考察增殖诱导配体(APRIL)-小干扰RNA(siRNA)/类脂质体复合物的毒性。方法 1 小鼠iv给予APRIL-siRNA/类脂质体复合物500 mg·kg-1,连续14 d称量小鼠体质量及观察死亡情况;2 每只豚鼠分别于第0, 7和14天左侧涂抹0.2 ml APRIL-siRNA/类脂质体复合物130 g·L-1, 2,4-二硝基氯代苯10 g·L-1(阳性对照),末次接触后14 d,将各...
探讨Foxp1对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 体外合成干扰Foxp1功能的小核酸片段(siRNA Foxp1),通过重组技术将其插入到慢病毒三质粒系统的转移质粒中,利用包装细胞(293T)将三质粒系统组装为完整的反转录慢病毒载体(lenti-pLL3.7-Foxp1-siRNA),感染高表达Foxp1的肝癌细胞株。同时构建不含有Foxp1-siRNA序列的直接三质粒系统包装的空病毒载体对照...
探讨应用整合素连接激酶(integrin-linked kinase, ILK)特异性siRNA沉默ILK基因的表达对人膀胱癌细胞凋亡的影响。 方法 将构建好的针对ILK基因的1个特异性siRNA表达质粒和1个无同源性的阴性对照质粒,在脂质体介导下稳定转染人膀胱癌BIU-87细胞,并将实验分为BIU-87 si ILK、BIU-87 vector及BIU-87细胞3组,运用TU...
探讨靶向切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的小干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)和鸦胆子油乳联合应用逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的效果。 方法: 设计并合成针对ERCC1基因对应序列的siRNA,采用转染试剂Lipofectamine 2000转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP;将实验组细胞分为:空白对照组、鸦胆子油处理组、siRNA处理组及鸦胆子...

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