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分析CpG基序与猪IFN-γ基因组合的重组表达质粒对口蹄疫灭活抗原的免疫佐剂效应。以亚洲Ⅰ型口蹄疫灭活病毒为抗原，与含有猪IFN-γ基因和CpG基序的重组质粒配伍，采用肌肉注射法免疫小鼠，加强免疫后检测口蹄疫特异性抗体和中和性抗体水平、T淋巴细胞增殖反应、体内细胞毒性T细胞杀伤反应以及细胞因子IL-4、IL-6和IFN-γ的分泌水平。发现猪IFN-γ和CpG 基序双因子重组质粒相对单一的因子能诱导...
将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位（47—85位AA）和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中，构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2。用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中，利用RTPCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况。将重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2、pCI-ORF2.VP2、对照质粒pCI-neo、PBS、猪细小病毒灭活苗和猪圆环病毒亚...
牙龈卟啉单胞菌FimA蛋白和IL-15真核共表达质粒的构建与鉴定
牙龈卟啉单胞菌 菌毛蛋白A DNA疫苗 转染
2010/8/19
目的构建含编码牙龈卟啉单胞菌FimA蛋白和IL- 15基因的真核共表达质粒, 并检测其在哺乳动物细胞中的表达。方法应用基因重组术,构建真核表达载体pIRES- fimA和真核共表达载体pIRES- fimA:IL15, 通过酶切、PCR及DNA序列测定鉴定获得的质粒, 用Lipofectamine 000介导转染CHO细胞, 用Western blot检测重组质粒在哺乳动物中的表达, 酶联免疫吸附...
人 PDCD4启动子真核报告质粒的构建和鉴定
程度性死亡因子4 启动子 荧光素酶 报告基因
2012/7/3
克隆人程序性死亡因子4(PDCD4)基因的启动子，插入荧光素酶报告基因载体中，并在细胞内检测其活性，为进一步研究PDCD4表达调控奠定基础。方法 采用PCR技术，从人基因组DNA中扩增出PDCD4启动子，插入荧光素酶报告基因载体pGL4-Basic中，测序所扩增的DNA序列，并将构建的pGL4-PDCD4-P1荧光素酶报告质粒，与内参照pRL-TK用脂质体法瞬时共转染OVCAR3，SKOV3细胞...
转染pCE质粒的干细胞对肝癌治疗的影响
基因治疗 干细胞 肝肿瘤 趋化因子CXCL12
2013/12/30
观察转染pCE质粒的干细胞对肝癌的治疗作用。方法 采用尾静脉直接注射法治疗大鼠肝脏转移瘤，设立阴性对照、干细胞、转染pCE质粒的干细胞组和5-Fu组，通过观察转移瘤在肝脏组织中的生长情况和卫星灶形成，肝脏组织的病理学改变，检测基质衍生因子1(stromal cell derived factor1, SDF -1) 表达，比较4组对肝癌的治疗作用。结果 转染pCE质粒的干细胞组对肿瘤细胞的生长...
参照GenBank上登录的副溶血弧菌鞭毛蛋白flaC基因序列设计引物，PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaC全长基因，序列分析结果显示该基因为1 155 bp，编码384个氨基酸.与GenBank中其他弧菌的同源基因序列比对显示，溶藻弧菌flaC基因与副溶血弧菌flaC基因的同源性最高(87%).将该基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中，获得带溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因的真核表...
不同转染方式对GFP表达质粒在小鼠肝脏的表达影响
GFP表达质粒 流体力学注射 门静脉 基因疗法
2012/6/29
研究经流体力学注射、门静脉和腹腔常规注射3种不同途径注射GFP表达质粒后，目的基因在小鼠肝脏的表达情况及其转基因效率。方法 将裸质粒或脂质体包裹的质粒DNA分别应用流体力学注射、门静脉及腹腔常规注射法注入同种异体小鼠体内,48?h后分别取血和肝组织, 通过荧光显微镜观察3种转染途径对质粒DNA在小鼠肝脏的表达影响。结果 流体力学注射组及门静脉常规注射组均可见大量绿色荧光蛋白表达，两组的荧光表达...
旨在分析生长抑素重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）转染效果的影响因素，探讨最佳转染条件，为进一步研究生长抑素基因疫苗的作用机制和作用效果奠定基础。以脂质体转染法将带有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞，探讨质粒转染HeLa细胞最佳条件的4个参数：质粒DNA剂量、脂质体剂量、最佳转染时间和质粒提取方法，在荧光显微镜下观察细胞转染情况并计...
根据GenBank登录的蒜氨酸酶序列(S73324)设计上下游引物,利用RT-PCR技术从浙江大蒜鳞茎中扩增蒜氨酸酶基因,获得了长度为1 523 bp的cDNA序列,提交GenBank(登录号: FJ786257,命名为浙江蒜氨酸酶)。利用生物信息学相关软件对该序列进行同源性比较、进化分析、蛋白质的结构和酶活性中心预测,引用pPICZaC载体构建蒜氨酸酶毕赤酵母真核表达重组质粒。结果表明:浙江蒜氨...
Ri质粒介导双价抗真菌病基因转化番茄的初步研究
转化植株 Ri质粒 双价抗真菌病基因 番茄
2010/4/1
以番茄新品种T431、1911、0701为材料，以9天苗龄的叶片为受体，通过农杆菌Ri质粒介导，将几丁质酶基因和?-1，3葡聚糖酶基因转化番茄。共获得再生植株100株，经PCR技术检测，导入几丁质酶基因和?-1，3葡聚糖酶基因的植株分别为27株和13株，转化率为27% 和13%；两个目的基因同时导入的植株10株，转化率为10%。PCR-Southern检测呈阳性，表明外源基因已经整合到番茄基因组中...
含AFP基因调控序列的pAFP-P53-EGFP质粒诱导AFP阳性肝癌细胞凋亡
P53 细胞周期阻滞 细胞凋亡
2012/5/18
观察含AFP基因调控序列的载体对AFP阳性肝癌细胞的靶向致凋亡作用。方法：将AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2 kb的AFP基因调控序列，构建pAFPEGFP载体，分别转染人肝癌HepG2（AFP阳性）、人肝癌SMMC7721（AFP阴性）和人宫颈癌HeLa（AFP阴性）细胞，荧光显微镜下观察EGFP荧光蛋白表达强度。引入P〖STBX〗53〖STBZ〗基因片段，构建p...
观察含AFP基因调控序列的载体对AFP阳性肝癌细胞的靶向致凋亡作用。方法：将AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2 kb的AFP基因调控序列，构建pAFP EGFP载体，分别转染人肝癌HepG2（AFP阳性）、人肝癌SMMC7721（AFP阴性）和人宫颈癌HeLa（AFP阴性）细胞，荧光显微镜下观察EGFP荧光蛋白表达强度。引入P〖STBX〗53〖STBZ〗基因片段，构建p...
了解深圳地区2所三级综合医院呼吸重症监护室（RICU）分离的革兰阴性（G-）菌产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶（ESBLs）情况及其耐药性与基因型特征。方法选择分离自上述2所医院RICU的对第一、二代及1种以上第三代头孢菌素耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，采用纸片扩散法及Etest进行药敏试验，酶提取物三维试验检测单产AmpC酶，美国临床实验室标准化研究所 (CLSI)推荐的表型筛选和确证试验检...
构建可同时表达野生型p53 (wt-p53)及siRNA-mdm2的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法：利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53、siRNA-mdm2、p53/siRNA-mdm2和siRNA-scramble重组质粒。脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞，半定量RT-PCR和Western blotting检测共表达质粒对...